ELISA測(cè)定原理及三種主要方法

　　ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的生物檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)酶標(biāo)記物催化底物顯色反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的定性與定量分析?。其核心步驟包括：

　　固相包被?：抗原或抗體吸附于聚苯乙烯微孔板表面。

　　特異性結(jié)合?：待測(cè)樣本中的目標(biāo)分子與固相載體上的配體結(jié)合。

　　信號(hào)放大?：酶標(biāo)記的二抗或抗原催化底物顯色，通過(guò)吸光度(OD值)定量?。

　　三種主要ELISA方法

　　及特點(diǎn)

　　1. ?直接ELISA?

　　原理?：抗原直接包被于固相載體，酶標(biāo)記的一抗直接結(jié)合目標(biāo)抗原?。

　　優(yōu)點(diǎn)?：步驟簡(jiǎn)單(無(wú)需二抗)，避免交叉反應(yīng)，適合高通量篩查?。

　　應(yīng)用?：病原體檢測(cè)(如流感病毒)、純化蛋白定量?。

　　2. ?間接ELISA?

　　原理?：一抗先與抗原結(jié)合，酶標(biāo)記的二抗再與一抗結(jié)合，信號(hào)放大5-10倍?。

　　優(yōu)點(diǎn)?：靈敏度高，適用于抗體效價(jià)檢測(cè)(如疫苗接種效果評(píng)估)?。

　　應(yīng)用?：傳染病診斷(HIV抗體篩查)、自身免疫病檢測(cè)?。

　　3. ?夾心ELISA?

　　原理?：雙抗體夾心結(jié)構(gòu)(捕獲抗體+檢測(cè)抗體)，需抗原至少有兩個(gè)表位?。

　　優(yōu)點(diǎn)?：靈敏度高(pg/mL級(jí))，抗干擾能力強(qiáng)，適合復(fù)雜樣本?。

　　應(yīng)用?：細(xì)胞因子檢測(cè)(IL-6)、腫瘤標(biāo)志物(CEA)、食品安全檢測(cè)?。

　　方法選擇建議

　　直接ELISA?：快速篩查，但靈敏度較低?。

　　間接ELISA?：需檢測(cè)抗體時(shí)優(yōu)先選擇(如抗體制備篩選)?。

　　夾心ELISA?：復(fù)雜樣本中微量蛋白檢測(cè)的選擇。

　　常見(jiàn)問(wèn)題與優(yōu)化

　　假陽(yáng)性/陰性?：可能因洗滌不充分或試劑污染導(dǎo)致，需嚴(yán)格質(zhì)控?。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線異常?：檢查抗原包被濃度或酶標(biāo)物活性?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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