ELISA試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇

以下是ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)條件選擇的綜合指南，本生結(jié)合關(guān)鍵參數(shù)與操作規(guī)范整理：

一、溫度與孵育條件‌

平衡溫度‌

試劑盒需室溫平衡20-30分鐘(避免冷凝水影響濃度)‌

部分HRP標(biāo)記抗體需即用即取，無需回溫‌

孵育溫度‌

常規(guī)孵育：37℃恒溫(±0.5℃誤差)‌

特殊需求：4℃過夜孵育(低背景信號(hào))‌

二、pH值與緩沖體系‌

洗滌液配制‌

含0.05% Tween-20的PBS緩沖液(pH 7.4)‌

結(jié)晶析出時(shí)需37℃加熱溶解后稀釋‌

樣本稀釋液‌

推薦pH 7.2-7.6的含蛋白保護(hù)劑緩沖液(如1% BSA)‌

三、時(shí)間控制‌

關(guān)鍵步驟時(shí)間‌

抗原抗體反應(yīng)：60-90分鐘(雙抗體夾心法)‌

顯色反應(yīng)：15-20分鐘(避光)‌

終止反應(yīng)‌

終止液加入后需5分鐘內(nèi)讀數(shù)(避免信號(hào)衰減)‌

四、樣本處理與稀釋‌

樣本預(yù)處理‌

離心去除沉淀(8000-1000×g 5分鐘)‌

高濃度樣本需預(yù)稀釋(避免鉤狀效應(yīng))‌

稀釋策略‌

血清/血漿推薦50%稀釋‌

組織裂解液需1-2 mg/mL蛋白濃度‌

五、質(zhì)量控制措施‌

對(duì)照設(shè)置‌

空白孔(稀釋液)+ 標(biāo)準(zhǔn)品梯度孔(R²>0.98)‌

陽性/陰性對(duì)照(驗(yàn)證試劑特異性)‌

重復(fù)與校準(zhǔn)‌

每樣本設(shè)2-3復(fù)孔(批內(nèi)CV<10%)‌

移液器定期校準(zhǔn)(尤其小體積加樣)‌

　　注：不同品牌試劑盒參數(shù)可能差異較大，建議以說明書為準(zhǔn)‌。

注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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