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BUNSEN講解:超濾離心管知識(shí)問(wèn)答

更新時(shí)間:2024-02-27    點(diǎn)擊次數(shù):1347

  BUNSEN講解:超濾離心管知識(shí)問(wèn)答


  1、問(wèn):超濾管的主要用途?

  答:濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(單株或雙株DNA/RNA樣本)、微生物、洗出液和凈化樣本的生物樣本。

  2、問(wèn):如何選擇合適的超濾管?

  答:通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。

  3、問(wèn):超濾管對(duì)那些化學(xué)物質(zhì)具有耐受性?

  答:適用于生物液體及水溶液樣本,具體的一些化學(xué)試劑的相容性,詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

  4、問(wèn):超濾管主要有什么組成?

  答:括一個(gè)蓋子、一個(gè)過(guò)濾器和一個(gè)離心管

  5、問(wèn):超濾管需要預(yù)處理嗎?

  答:新買(mǎi)的超濾管是干燥的并且含有微量甘油。可用緩沖液或Millipore水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在,用0.1 N NaOH清洗,然后用緩沖液或Millipore水再次清洗后甩干。

  6、問(wèn):超濾管可以重復(fù)使用嗎?

  7、答:可以,一般也就用一兩次就換新的,先用緩沖液洗滌,再用去離子水反復(fù)洗滌。殘留蛋白雜質(zhì)多時(shí),可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗,去除和溶解蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)的。然后將超濾離心管的超濾膜泡在疊氮鈉溶液或20%的乙醇溶液中,防止長(zhǎng)菌,而且防干,一旦潤(rùn)濕后應(yīng)避免重新干燥,在干燥會(huì)影響濾膜的孔徑。

  注意:不可以用超聲洗滌!清洗過(guò)程槍頭一定不能碰到濾膜。

  8、問(wèn):如何達(dá)到轉(zhuǎn)速和離心的平衡?

  答:質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,有所不同。具體可參閱附件里的說(shuō)明書(shū)。離心機(jī)的加速度調(diào)至低檔,減小對(duì)膜的壓力。

  注意:在實(shí)際使用中,一般轉(zhuǎn)速開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低,這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。

  9、問(wèn):為什么離心過(guò)程會(huì)發(fā)生堵管?

  答:若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過(guò)高還是緩沖液不合適,若是蛋白濃度可用多個(gè)超濾管同時(shí)超濾,降低蛋白濃度;若是緩沖液不合適,需要跟換合適的緩沖液,直到蛋白不發(fā)生沉淀。

  10、問(wèn):超濾管是無(wú)菌的嗎?

  答:不是

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